重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法

3124 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法
    本法采用高效液相色谱法测定供试品中重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量。  
    照高效液相色谱法（通则0512）测定.
    色谱条件 色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，孔径30nm，粒度5μm，直径4.6mm，长250mm；柱温为30℃±5℃，供试品保存温度为2～8℃；以0.1%三氟乙酸的水溶液为流动相A液，以0.1%三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B液；流速为每分钟1ml；检测波长214nm；按下表进行梯度洗脱。
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    编号   时间/分钟   A/%    B/%
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    1         0        60     40
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    2         40       20     80
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    3         45        0    100
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    4         50       60     40
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    5         60       60     40
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    检查法 取1支标准品，按说明书复溶。用20mmol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.0）将标准品及供试品调节至相同蛋白质浓度，将供试品溶液与标准品溶液以相同体积分别注入液相色谱仪（进样体积不小于10μl，进样量4～6μg），按上表进行梯度洗脱。标准品溶液、供试品溶液均进样3 次，记录色谱图并计算峰面积。按下式计算重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量（μg/ml）：
                         
                               CR×Ax×nx 
    供试品蛋白质含量（μg/ml）=-------------
                                 AR×nR                
    式中CR为复溶所得标准品溶液的蛋白质含量，μg/ml；
    AR为标准品溶液的平均峰面积；
    Ax为供试品溶液的平均峰面积；
    nR为标准品溶液的稀释倍数；
    nx为供试品溶液的稀释倍数。